NK细胞（自然杀伤细胞）是人体对抗病原体、癌变和老化细胞的首道防线，近年来，利用NK细胞特异性和杀伤能力开发的新型免疫疗法备受瞩目。然而，高纯度NK细胞的快速培养极具挑战，因为NK细胞生长速度缓慢，且杀伤活性和细胞因子产生能力易受培养条件影响。 

IMMUNOVESSEL悬浮细胞培养瓶是一种创新的细胞培养系统，甄选稳定可靠的医用级材质，专利0.2μl疏水透气膜，上下双层透气设计，可以显著优化细胞培养条件、改善细胞生长速度和功能表现，助力高纯度NK细胞快速获取。 

英诺维尔实验室（INNOLAB）通过在IMMUNOVESSEL-500中进行NK细胞培养实验，为研究人员提供详细的实验数据、流程及培养建议，帮助其高效、高纯度地获取NK细胞，加速免疫治疗领域取得突破性进展。   

01 实验流程

初始细胞数及体积为试剂盒建议值一半，各试剂均按照1/2进行补加，先取1/2NK试剂A和DPBS混合后，4℃包被过夜，接种前弃去包被液。 

Day 0：取新鲜外周血进行PBMC分离，用完全培养基重悬细胞，调整密度至1.5~2.0E+06cell/ml，取12ml细胞悬液，加入1/2NK试剂B，灭活血浆0.62ml，转入包被培养瓶内，总体积约12.5ml； 

Day 3：根据细胞状态，加入1/2NK试剂C，灭活血浆1.25ml，再加入23.75ml完全培养基，总体积约32.5ml；

 Day 5：转入Vessel-500培养瓶，加入1/2NK试剂D，灭活血浆4.38ml，再加入83.12ml完全培养基，总体积约125ml； 

Day 7：加入灭活血浆4.38ml，再加入120ml完全培养基，总体积约250ml； 

Day 9：加入灭活血浆7.5ml，再加入142.5ml完全培养基，总体积约400ml； 

Day  11：过夜静置后，弃去70ml上清液，再加入对应体积的完全培养基，总体积约400ml； 

Day  13：过夜静置后，弃去70ml上清液，再加入对应体积的完全培养基，总体积约400ml； 

Day 15：取样计数及流式检测，收获细胞；  

02 实验数据   

起始PBMC密度1.59E+06cell/ml，体积12.5ml

在15天扩增时间内，细胞以高活率状态扩增至200倍左右！扩增期间，NK分子阳性率维持不变。相对参照组，在VESSEL500中培养的NK细胞有明显数量优势及质量优势。  

流式细胞仪检测数据（CD3-/CD56+比例） 

通过分析NK细胞表型标记物CD3-/CD56，确定样本中NK细胞随时间呈倍数级扩增。   

明场镜检结果  

明场下镜检显示，NK细胞增殖明显，且在培养瓶中均匀分布，扩增后的NK细胞呈现出健康的圆形状态，细胞大小相对一致，表现活跃，具有高细胞活性。   

03 培养建议

1、如按NK试剂盒建议细胞量进行培养，建议最终培养体积为2-4个IMMUNOVESSEL-500培养瓶； 

2、从开始到Day5可按照NK细胞试剂盒说明书进行接种及补液操作，后续补液建议按照1倍培养体积的量进行补液（保证补液后细胞密度在1.0E+06cell/ml以上）； 

3、当培养体积达到最大值时（IMMUNOVESSEL-500培养瓶建议最大培养体积400ml ），可在静置培养过夜后直接弃掉50%-70%上清液，补加新鲜完全培养基继续培养；  

04 客户评价

总结 

结合数据分析和客户使用反馈，IMMUNOVESSEL培养瓶在高性能培养NK细胞领域的出色表现得到有力验证。流式细胞仪和明场镜检结果进一步证实IMMUNOVESSEL培养瓶显著提高NK细胞生长速度和增殖能力，同时保持细胞高水平活性。 IMMUNOVESSEL已成为实验室培养NK细胞的首选容器，为免疫防御、抗肿瘤免疫疗法、移植免疫调节以及免疫治疗等研究和应用领域提供优秀的解决方案。