前言
自然杀伤细胞（NK细胞）是人体免疫系统的关键组成部分，在对抗病原体和肿瘤细胞中发挥着重要作用。然而，传统NK细胞培养方法面临生长速度慢、活性不稳定等挑战。INNOVESSEL悬浮细胞培养瓶是一种创新的细胞培养系统，甄选稳定可靠的医用级材质，专利0.2μl疏水透气膜，上下双层透气设计，可以显著优化细胞培养条件、改善细胞生长速度和功能表现，为免疫治疗研究提供了高效工具。
英诺维尔实验室通过在INNOVESSEL-500中进行NK细胞培养实验，为研究人员提供详细的实验数据、流程及培养建议，帮助其高效、高纯度地获取NK细胞，加速免疫治疗领域取得突破性进展。
实验流程
初始细胞数及体积为试剂盒建议值一半，各试剂均按照1/2进行补加，先取1/2NK试剂A和DPBS混合后，4℃包被过夜，接种前弃去包被液。
Day 0
取新鲜外周血进行PBMC分离，用完全培养基重悬细胞，调整密度至1.5~2.0E+06cell/ml，取12ml细胞悬液，加入1/2NK试剂B，灭活血浆0.62ml，转入包被培养瓶内，总体积约12.5ml；
Day 3
根据细胞状态，加入1/2NK试剂C，灭活血浆1.25ml，再加入23.75ml完全培养基，总体积约32.5ml；
Day 5
转入INNOVESSEL-500培养瓶，加入1/2NK试剂D，灭活血浆4.38ml，再加入83.12ml完全培养基，总体积约125ml；
Day 7
加入灭活血浆4.38ml，再加入120ml完全培养基，总体积约250ml；
Day 9
加入灭活血浆7.5ml，再加入142.5ml完全培养基，总体积约400ml；
Day11
过夜静置后，弃去70ml上清液，再加入对应体积的完全培养基，总体积约400ml；
Day 13
过夜静置后，弃去70ml上清液，再加入对应体积的完全培养基，总体积约400ml；
Day 15
取样计数及流式检测，收获细胞；
实验数据与结果
扩增效率
起始PBMC密度1.59E+06cell/ml，体积12.5ml。在15天扩增时间内，细胞以高活率状态扩增至200倍左右！扩增期间，NK分子阳性率维持不变。相对参照组，在INNOVESSEL-500中培养的NK细胞有明显数量优势及质量优势。
纯度分析
流式检测显示CD3⁻/CD56⁺ NK细胞比例稳定，证实培养系统的高效性。
流式细胞仪检测数据（CD3-/CD56+比例）
明场镜检结果
明场显微镜下细胞形态健康，聚集状态良好。
培养建议
如按NK试剂盒建议细胞量进行培养，建议最终培养体积为2-4个INNOVESSEL-500培养瓶；
从开始到Day5可按照NK细胞试剂盒说明书进行接种及补液操作，后续补液建议按照1倍培养体积的量进行补液（保证补液后细胞密度在1.0E+06cell/ml以上）；
当培养体积达到最大值时（INNOVESSEL-500培养瓶建议最大培养体积400ml ），可在静置培养过夜后直接弃掉50%-70%上清液，补加新鲜完全培养基继续培养；
总结
结合数据分析和客户使用反馈，INNOVESSEL培养瓶在高性能培养NK细胞领域的出色表现得到有力验证。流式细胞仪和明场镜检结果进一步证实INNOVESSEL培养瓶显著提高NK细胞生长速度和增殖能力，同时保持细胞高水平活性。 INNOVESSEL已成为实验室培养NK细胞的首选容器，为免疫防御、抗肿瘤免疫疗法、移植免疫调节以及免疫治疗等研究和应用领域提供优秀的解决方案。
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